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环球即时：动物细胞培养的一般步骤是什么_动物细胞培养的步骤简介

时间：2023-04-19 12:43:34来源：万能网


(资料图)

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1、复苏：将冻存管从液氮中取出，立即放入37水浴中，轻轻摇动。液体融化后(约1-1.5分钟)取出，在洁净工作台上喷些酒精。将上述细胞悬液吸入装有10ml培养基的15ml离心管中(用培养基冲洗冻存管一次，将贴壁细胞全部冲洗干净)，1000 rpm离心5min。倒出上清液，加入1ml培养基以悬浮细胞。吸到盛有10ml培养基的10cm培养皿中，轻轻来回摇动，使培养皿中的细胞分布均匀。标记细胞的类型和日期、培养人的姓名等。放入CO2培养箱中培养，待细胞贴壁后更换培养基。每三天换一次培养基。

2、传代，培养皿内细胞覆盖率达到80%-90%时需要传代。吸干原来的培养基。加入适当的胰蛋白酶(只要能覆盖细胞)消化1-2分钟。细胞变圆后，加入等体积的含血清培养基停止消化。用吸管吹细胞使其悬浮。将细胞吸入15ml离心管中，并以1000 rpm离心5分钟。倒出上清液，加入1-2ml培养基，将细胞全部吹爆。根据细胞类型，将细胞转移到几个培养皿中。一般有5个癌细胞，3个正常细胞。继续培养。

3、冷冻，消化细胞，离心(同上)。用配制好的冻存液悬浮细胞，分装到已灭菌的冻存管中，静置几分钟，注明细胞类型和冻存日期。430分钟，-2030分钟，-80过夜，然后放入液氮灌溉保存。冷冻液的制备：70%完全培养基20？%DMSO。DMSO应缓慢加入，并在滴下的同时摇动。

本文到此结束，希望对大家有所帮助。

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